樣品預(yù)處理方法

樣品預(yù)處理應(yīng)包括進(jìn)樣前的一切操作，除了稱重、溶解、稀釋等步驟外，樣品還需要：

①過濾；

②萃取；

③衍生化(柱前衍生)；

④液相色譜(低壓柱層析)；

這些操作可以是手工進(jìn)行或?qū)嵭凶詣?dòng)化操作，樣品預(yù)處理的目的是除去干擾物、增加檢測(cè)器靈敏度(富集)、保護(hù)色譜柱等。樣品預(yù)處理同時(shí)也是為了避免色譜分離故障，其中，樣品萃取是關(guān)鍵的一步，要從大量的干擾物中萃取出微量組分難度極大。

有些樣品經(jīng)預(yù)處理后還不能作進(jìn)樣分析，需進(jìn)行衍生化處理，使一些無紫外吸收或無熒光的組分，經(jīng)過衍生化后能用紫外和熒光檢測(cè)器檢測(cè),這樣既提高了靈敏度，又改善了分離度(質(zhì)量變化)。樣品預(yù)處理的同時(shí)也會(huì)帶來一些問題，如，樣品損失、樣品被污染、衍生化反映不*或多種反應(yīng)物生成等。。。衍生反應(yīng)常會(huì)影響試驗(yàn)的精確度，或者在整個(gè)樣品預(yù)處理過程中帶來誤差。

用于液相色譜分析的樣品溶液必須均勻而無顆粒，有顆粒會(huì)損壞進(jìn)樣器并阻塞柱頭。處理好的樣品在準(zhǔn)備上柱前應(yīng)對(duì)準(zhǔn)光線搖動(dòng)，檢查樣品溶液中有無顆粒。只要看到顆粒、混濁或乳化，就應(yīng)過濾一下，過濾膜要能截留住0.15μm以上的顆粒，樣品過濾的過程中可能引起：樣品被污染，因過濾吸附降低樣品組分的含量，樣品溶劑揮發(fā)引起誤差。

萃取的目的是從共溶的樣品介質(zhì)中分離出被分析的組分，或者，減少損壞柱的物質(zhì)(如，蛋白質(zhì)等)和干擾物。一般采用有機(jī)溶劑萃取，要求萃取用的溶劑毒性低、揮發(fā)性好、雜質(zhì)少、對(duì)待測(cè)樣品有良好的溶解度且又與水不相混溶。

常用的有yi醚、醋酸乙酯、二氯甲烷、氯仿、苯或者兩種以上的混合溶劑。萃取后一般可直接進(jìn)樣，有時(shí)需要濃縮或吹干濃縮，再用定體積的液體或流動(dòng)相溶解進(jìn)樣。這樣增加了樣品濃度,提高了靈敏度，同時(shí)，避免了溶劑峰對(duì)樣品峰的干擾。在萃取是要考慮樣品分子的溶解能力。除了脂溶性和水溶性組分外，還有用脂溶性的組分制成水溶性的鹽，萃取方法如下：

水溶性樣品

（1）酸性組分及生成的鹽萃取方法：

有機(jī)溶劑萃取雜質(zhì)后調(diào)成酸性，再加有機(jī)溶劑萃取或進(jìn)樣，或在N2流下吹干，用適當(dāng)?shù)娜軇┙夂筮M(jìn)樣。

（2）堿性組分及生成的鹽萃取方法：

有機(jī)溶劑萃取雜質(zhì)后調(diào)成堿性，再加有機(jī)溶劑萃取或進(jìn)樣，或在N2流下吹干，用適當(dāng)?shù)娜軇┤芙夂筮M(jìn)樣。

（3）中性組分萃取方法：

①有機(jī)溶劑萃取雜質(zhì)后，直接用反相色譜法分析；

②脂溶性組分萃取方法:有機(jī)溶劑萃取或進(jìn)樣，或在N2流下吹干，用適當(dāng)?shù)娜軇┤芙夂筮M(jìn)樣；

分析中的污染

一般檢測(cè)的環(huán)境、容器、試劑都是影響測(cè)定結(jié)果的因素。

①環(huán)境污染儀器室的有害氣體、氣溶液、灰塵等等都能造成污染，影響檢測(cè)結(jié)果，這種污染很難校正。因此，儀器室與其他實(shí)驗(yàn)室應(yīng)隔離，保持清潔，儀器室內(nèi)應(yīng)安裝空調(diào)，注意：防潮、防腐、防震、空氣相對(duì)濕度應(yīng)小于70 %為宜。

②容器實(shí)驗(yàn)室常用的器皿有玻璃類、瓷類、石英類、塑料類等，在進(jìn)行分析時(shí)，應(yīng)按照待則樣品的要求來選則器皿，不管使用哪種器皿，容器的洗條清潔都是很重要的，也是取得好的檢測(cè)結(jié)果的基本保證。

③試劑在液相色譜分析中，所選用的試劑必須是色譜純、優(yōu)級(jí)純或分析純，如果，用含量有雜質(zhì)的試劑，則會(huì)出現(xiàn)雜峰而影響測(cè)定結(jié)果。

標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置

在配置標(biāo)準(zhǔn)溶液時(shí)，先要配置現(xiàn)定濃度的內(nèi)標(biāo)溶液，在標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液中最好使用同一批次配制的內(nèi)標(biāo)溶液以減少誤差。

(1)配制標(biāo)準(zhǔn)溶液的物質(zhì)應(yīng)當(dāng)是色譜純的、性質(zhì)穩(wěn)定。(2)常用的標(biāo)準(zhǔn)溶液應(yīng)存放在棕色溶液瓶中低溫保存。(3)在配制維生素類標(biāo)準(zhǔn)品時(shí),要放置在棕色容量瓶中或避光放置以免分解。

樣品預(yù)處理過程中的主要故障與解決辦法

(1)色譜圖中出現(xiàn)無關(guān)的峰,原因有可能是樣品過濾器帶來污染,解決方法如下:

①將過濾器浸泡在樣品溶劑中并進(jìn)樣試驗(yàn);

②改變過濾器類型;

③采用交替清洗技術(shù)；

(2)一些或全部化合物的峰比預(yù)期的小，尤其是低濃度的樣品，原因可能是樣品過濾器表面吸附下降，解決方法如下：

①改變過濾器類型；

②嚴(yán)格按相同條件處理所用樣品；

③采用交替清洗技術(shù)。

(3)回收率太低或差，原因可能是，萃取不*，解決方法如下：

①增加萃取時(shí)間，使用熱溶劑；

②修改清洗方法；

(4)色譜峰變寬,柱壽命縮短,原因可能是樣品帶來的干擾與污染,應(yīng)改進(jìn)清洗方法。

(5)精度差,原因可能是回收不*,解決方法如下:

①改進(jìn)或替換衍生化、分離、萃取或其他條件；

②用自動(dòng)化處理裝置提高精度；

小結(jié)

總之，對(duì)分析儀器來說，避免故障的最主要的做法是正確的操作和調(diào)節(jié)，切忌盲目操作，對(duì)核心部位如離子室、微電流放大器等減少震動(dòng)和碰撞，保證絕緣，并減少各種系統(tǒng)誤差要注意以上要點(diǎn)，但，還要注意日常的儀器保養(yǎng)，色譜柱子的維護(hù)，儀器室保持清潔，這樣才能使液相色譜處于最佳工作狀態(tài)，在分析中發(fā)揮其重要的作用。